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熒光分光光度計(jì)的原理和優(yōu)缺點(diǎn)介紹
更新時(shí)間:2017-07-31   點(diǎn)擊次數(shù):3999次

熒光分光光度計(jì)是用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強(qiáng)度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數(shù),從各個(gè)角度反映了分子的成鍵和結(jié)構(gòu)情況。

 

熒光分光光度計(jì)的基本原理:

 

由高壓汞燈或氙燈發(fā)出的紫外光和藍(lán)紫光經(jīng)濾光片照射到樣品池中,激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)發(fā)出熒光,熒光經(jīng)過(guò)濾過(guò)和反射后,被光電倍增管所接受,然后以圖或數(shù)字的形式顯示出來(lái)。 物質(zhì)熒光的產(chǎn)生是由在通常狀況下處于基態(tài)的物質(zhì)分子 吸收激發(fā)光后變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài), 這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的,在返回基態(tài)的過(guò)程中將一部分的能量又以光的形式放出,從而產(chǎn)生熒光。

不同物質(zhì)由于分子 結(jié)構(gòu)的不同,其激發(fā)態(tài)能級(jí)的分布具有各自不同的特征,這種特征反映在熒光上表現(xiàn)為各種物質(zhì)都有其特征熒光激發(fā)和發(fā)射光譜;,因此可以用熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的不同來(lái)定性地進(jìn)行物質(zhì)的鑒定。

 

熒光分光光度計(jì)的優(yōu)缺點(diǎn):

 

優(yōu)點(diǎn):靈敏度高,可以用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜,不但可以做一般的定量分析, 而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化, 從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。

缺點(diǎn):

1、熒光的光強(qiáng)并不高,所以呈線(xiàn)性情況有時(shí)不很理想;

2、某些反應(yīng)熒光持續(xù)的時(shí)間較短;

3、熒光的發(fā)散方向不集中,不像透射光那樣集中,強(qiáng)度高;

4、受某些離子的干擾影響,熒光會(huì)湮滅,試驗(yàn)速度必須要快。

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